丹麥SSI鏈球菌血清分型說明書

應用

丹麥國家血清研究院的診斷用鏈球菌抗血清用于通過Neufeld方法¹和Lancefield方法^2,3對鏈球菌進行定性識別和分型。

簡介

丹麥國家血清研究院的鏈球菌抗血清在兔體內(nèi)培養(yǎng)。鏈球菌抗血清可用于對A、B、C、D和L群鏈球菌進行識別以及對B群鏈球菌和豬鏈球菌進行血清分型。抗血清供應規(guī)格為1 mL瓶裝產(chǎn)品（以*作為防腐劑）。血清生產(chǎn)過程中在需要時采用吸附方法排除交叉反應。

原理

Lancefield方法：當一種酸性抗原提取物與直接針對細菌表面成分的特異性抗血清混合時，細胞之間將通過抗原-抗體鍵連接在一起而形成聚集（沉淀）。當在毛細管內(nèi)反應時，這種現(xiàn)象可以用裸眼直接觀察到。

Neufeld方法：通過將特異性抗血清與一種鏈球菌培養(yǎng)物混合，可以確定莢膜抗原。莢膜反應是鏈球菌莢膜多糖與其同源性抗體之間發(fā)生原位免疫沉淀反應的結果。顯微鏡下陽性反應表現(xiàn)為莢膜可見和鏈球菌凝集。莢膜的大小取決于血清型和生長條件。

需要但未提供的材料

Neufeld檢測：

5%血液瓊脂平板

接種環(huán)

移液管或任何可以移取液滴的其它用具

載玻片和蓋玻片

浸油

pH 7.4的鹽水

相差顯微鏡（放大100 X，油浸物鏡）

Lancefield檢測：

5%血液瓊脂平板

葡萄糖肉湯

接種環(huán)

離心機

移液管或任何可以移取液滴的其它用具

0.06N, 0.1N和0.2N HCl溶液

水浴（100ºC）

酚紅（指示劑）

0.2N NaOH溶液

毛細管

步驟

通用

每一血清型將在Lancefield方法或Neufeld方法中顯示反應陽性（在血清出廠證書上將指示優(yōu)先選擇的方法）。當與陰性對照比較時，通常結果會更加明顯。

Neufeld檢測

1.    將一小滴（3-6 μL）鹽水滴在玻片上。

2.    從血液瓊脂平板上轉(zhuǎn)移小量培養(yǎng)物到玻片上，然后與鹽水混合均勻。

3.    加入等量抗血清，然后與液滴充分混合。

4.    立即在混合物上加蓋蓋玻片（必須保持濕潤）。

5.    在相差顯微鏡下觀察混合物。反應可在半小時內(nèi)保持穩(wěn)定（在未干燥的前提下）。

6.    如可見莢膜（細菌表現(xiàn)腫脹），則反應為陽性。

Lancefield檢測（改良版本）

使鏈球菌于5%血液瓊脂平板上生長過夜。

1.    將少量菌落加入6 mL葡萄糖肉湯，然后在35-37ºC下培養(yǎng)過夜。

2.    將懸液以3000 rpm轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后移去上清液。

3.    將0.06N、0.1N或0.2N 的HCl溶液 0.1 mL加入細菌沉淀物中（在血清出廠證書上將指示優(yōu)先選擇的方法）。

4.    將酸性懸液置于水浴（100ºC）中加熱15分鐘。

5.    在自來水中冷卻酸性懸液。

6.    通過滴入0.2N NaOH溶液直至液體變?yōu)樽?/span>/橙色［使用酚紅作為pH指示劑，紅色（pH > 8.2）－黃色（pH < 6.4）］調(diào)整pH值至7左右。

7.    將懸液以3000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后將上清液（酸性抗原提取物）轉(zhuǎn)移到一個新的玻片上。

8.    使用毛細管吸取等量的抗血清（首先）和酸性抗原提取物（其次）。必須將抗血清置于毛細管上部，以便使其擴散通過酸性提取物。

9.    陽性反應為發(fā)生沉淀。正對光源讀取結果。

保存條件與有效期限

避光保存于2-8°C。有效期限見包裝。有時在長期保存后可見因脂蛋白沉淀引起的混濁。采用離心（10,000g）然后過濾除菌（0.22 μm）的方法即可除去沉淀和/或污染物。

丹麥SSI鏈球菌血清分型說明書

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